Новости
01.12.2016


29.11.2016


29.11.2016


29.11.2016


28.11.2016


24.09.2014

Пробы для микробиологического анализа отбирают в стерильную посуду с помощью стерильных приспособлений.
Отборники, черпаки, ложки, металлические трубки, щупы, шпатели или другие приспособления для отбора проб каждый раз перед использованием должны быть простерилизованы фламбированием (протиранием ватой, смоченной спиртом, с последующим поджиганием) или в автоклаве.
Объединенную пробу объемом 500 см3 составляют из точечных проб, отобранных из каждой фляги или цистерны после органолептической оценки молока и рассортировки его по кислотности.
Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (1-2%-ный раствор соляной кислоты) в течение 15 мин и затем ополаскивают дистиллированной водой.
Вымытую посуду стерилизуют в сухожаровом шкафу при температуре 160±5°С в течение 2 ч или в автоклаве при 121±2°С в течение 30±1 мин с последующим подсушиванием.
Чашки Петри, пипетки стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Резиновые пробки стерилизуют в автоклаве завернутыми в бумагу. При отсутствии аппаратуры для стерилизации посуду, пипетки и пробки непосредственно перед испытанием кипятят в дистиллированной воде не менее 30 мин. Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах и ящиках с крышками.
Приготовление питательных сред и реактивов.
1. Раствор хлорида натрия концентрации 0,85% готовят растворением 8,5 г хлорида натрия в 1000 см3 дистиллированной воды, разливают в пробирки диаметром 21 мм по 10 см3, в колбы — по 93 см3 и стерилизуют при температуре 121±2°С в течение 20±1 мин. После стерилизации в пробирках должно остаться 9 см3 раствора, в колбах — 90 см3 (количество, необходимое для разведения посевного материала).
2. Фосфатный буфер сначала готовят в виде концентрата: в 500 см3 дистиллированной воды растворяют 34 г одно-замещенного фосфата калия, раствором гидроксида натрия устанавливают pH 7,2, добавляют дистиллированной воды до 1000 см3.
Для приготовления рабочего фосфатного буфера 1,25 см3 концентрата вносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, добавляют дистиллированной воды до метки, разливают в пробирки по 10 см3, в колбы — по 93 см3, и стерилизуют при температуре 121±2°С в течение 15±1 мин.
3. Питательная среда для мезофильных аэробных и фа-культативно-анаэробных микроорганизмов: 40 г сухой питательной среды (25 г гидролизованного молока и 15 г агара) помещают в колбу и доливают дистиллированной воды до 1000 см3, перемешивают, нагревают до полного растворения агара (при наличии осадка фильтруют), устанавливают pH 6,8-7,0, разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре 121±2°С в течение 15±1 мин.
4. Среда Кесслер модифицированная: 16 г сухой среды помещают в колбу и доливают дистиллированной воды до 1000 см3, кипятят при помешивании 20-30 мин. После охлаждения объем доводят водой до 1000 см3, фильтруют через вату. Разливают в пробирки с поплавками по 5 см3 или колбочки с поплавками по 40-50 см3 и стерилизуют при температуре 121±2°С в течение 10±1 мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.
Допускается приготовление среды Кесслер из отдельных ингредиентов. Для этого к 1000 см3 дистиллированной воды прибавляют 10 г пептона, 50 см3 стерильной желчи (желчь бычья или других сельскохозяйственных животных), кипятят смесь при помешивании 20-30 мин и фильтруют через вату. В полученном фильтрате растворяют 2,5 г лактозы, после охлаждения доводят объем водой до 1000 см3, устанавливают pH 7,4-7,6, после чего добавляют 2 см3 1%-ного раствора кристаллического фиолетового, разливают в пробирки или колбочки и стерилизуют.
Разведение продуктов для посева. Перед посевом готовят ряд последовательных десятикратных разведений продукта в стерильном растворе хлорида натрия или фосфатном буфере. Для этого стерильной пипеткой 10 см3 продукта вносят в 90 см3 стерильного раствора. Получают разведение 1:10.
Аналогично из первого разведения готовят второе — 1:100 и т. д. Для каждого разведения берут новую стерильную пипетку.
При посеве на чашки Петри материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случае пользуются одной пипеткой.
Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов. Метод основан на способности мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов размножаться на плотном питательном агаре при температуре 30±1°С в течение 72 ч.
Количество засеваемого продукта устанавливают с учетом наиболее вероятной микробной обсемененности. Выбирают те разведения, из которых на чашках вырастает не менее 30 и не более 300 колоний.
Из каждой пробы делают посев на 2-3 чашки. Каждое из разведений должно быть засеяно в количестве 1 см3 в одну чашку Петри и залито 10-15 см3 расплавленной и охлажденной до температуры 40-45°С питательной средой.
Допускается посев исследуемого продукта из одного разведения в количестве 1,0 и 0,1 см3.
После застывания агара чашки Петри ставят крышками вниз в термостат с температурой 30±1°С на 72 ч.
Число выросших колоний подсчитывают в каждой чашке, поместив ее вверх дном на темном фоне и пользуясь лупой с увеличением в 4-10 раз. При большом числе колоний и равномерном их распределении дно чашки Петри делят на четыре и более одинаковых сектора, подсчитывают число колоний в двух-трех секторах (но не менее чем на 1/3 поверхности чашки), находят среднее арифметическое и умножают на общее количество секторов.
Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в 1 см3 (или 1 г) продукта (N) вычисляют по формуле

N = n * 10т,

где n — число колоний, подсчитанных на чашке Петри; т — порядковый номер десятикратного разведения.
За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое, полученное по всем чашкам.
Определение бактерий группы кишечной палочки (БГКП). Метод основан на способности БГКП (бесспоровые грамотрицательные, аэробные и факультативно-анаэробные палочки, являющиеся в основном представителями родов Eschericyia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia) сбраживать лактозу с образованием кислоты и выделением газа при температуре 37±1°С в течение 24 ч.
По 1 см3 соответствующих разведений продукта засевают в пробирки с 5 см3 среды Кесслер. Пробирки помещают в термостат при температуре 37±1°С на 18-24 ч. По истечении времени инкубации пробирки с посевами просматривают. При отсутствии газообразования дают заключение об отсутствии БГКП.
При наличии газообразования в пробирке с определенным разведением считается, что в продукте обнаружены БГКП.