Новости
07.12.2016


07.12.2016


07.12.2016


06.12.2016


06.12.2016


24.09.2014

Метод основан на окислении цистина и метионина смесью пероксида водорода с муравьиной кислотой до цистеиновой кислоты и метионинсульфона и последующем их разделении на ионообменной хроматографической колонке после гидролиза соляной кислотой концентрации 6 моль/дм3. Интенсивность окраски комплекса, образующегося при реакции этих продуктов с нингидриновым реактивом, пропорциональна содержанию аминокислоты в растворе.
Метод распространяется на все виды кормов, комбикормов и комбикормовое сырье.
Подготовка проб. Среднюю пробу сена, сенажа, зеленой массы измельчают на отрезки длиной 1-3 см; корнеплоды разрезают на пластинки (ломтики) толщиной до 0,8 см. Методом квартования выделяют часть средней пробы, масса которой после высушивания должна быть не менее 100 г. Высушивание проб проводят в сушильном шкафу при температуре 60-65 C до воздушно-сухого состояния. Высушенную пробу размалывают на мельнице и просеивают через сито. Остаток на сите дополнительно измельчают, добавляют к просеянной части и тщательно перемешивают.
Средние пробы комбикормов, зерна, жмыхов, шротов, гранул травяной муки или витаминной муки из древесной зелени размалывают без предварительного подсушивания и просеивают через сито. Корма с содержанием жира более 10% предварительно обезжиривают.
Подготовленные пробы хранят в стеклянной или пластмассовой банке с крышкой в сухом темном месте не более 2 лет.
Приготовление растворов:
1. Окислительная смесь готовится в день проведения испытания из 30%-ного раствора пероксида водорода и муравьиной кислоты, взятых в соотношении 1:9.
2. Буферный раствор (pH 2,18-2,22). В мерной колбе 19,6 г трехзамещенного цитрата натрия растворяют в 200-300 см3 дистиллированной воды, приливают 16,6 см3 концентрированной соляной кислоты, 1 см3 фенола и доводят объем до 1 дм3 дистиллированной водой. Концентрацию водородных ионов контролируют на рН-метре и при необходимости корректируют 50%-ном раствором гидроксида натрия или концентрированной соляной кислотой.
3. Растворы аминокислот. Основной раствор содержит 187 мг цистеиновой кислоты и 181 мг метионинсульфона в 100 см3 раствора HCl концентрации 0,1 моль/дм3.
Стандартный раствор готовят разведением 25 см3 основного раствора в 100 см3 раствора HCl. 1 см3 стандартного раствора содержит 0,47 мг цистеиновой кислоты и 0,45 мг метионинсульфона, что соответствует 2,5 мкмоль каждой аминокислоты. Раствор хранят в герметично закрытых флаконах в холодильнике в течение нескольких лет.
Рабочий раствор аминокислот готовят разведением стандартного раствора в цитратно-фенольном буфере до концентрации, рекомендуемой для конкретного типа аминокислотного анализатора.
Проведение испытания и обработка результатов. Навеску воздушно-сухого корма массой 100,0±0,1 мг помещают в чашку устройства для выпаривания гидролизатов (или в фарфоровую чашку в случае выпаривания на водяной бане), приливают 5 см3 свежеприготовленной окислительной смеси и выпаривают при постоянном помешивании при температуре 60°С. Сухой остаток количественно переносят в ампулу термоблока или в пробирку с перетяжкой, используя 10 см3 раствора HCl концентрации 6 моль/дм3. Ампулу герметично закрывают тефлоновой крышкой и устанавливают в термоблок для гидролизата при температуре 110°C на 4 ч.
Гидролиз в термостате: ампулу запаивают в пламени газовой горелки в месте перетяжки и помещают в предварительно нагретый до температуры 110°C сушильный шкаф на 16 ч.
Гидролиз в автоклаве проводят при температуре 137°С и давлении 0,25 МПа в течение 3 ч в пробирках вместимостью 20 см3, закрытых стеклянными колпачками или воронками для предотвращения разбрызгивания кислоты.
Гидролизаты охлаждают до комнатной температуры, перемешивают и фильтруют через безвольный фильтр (первую порцию фильтрата для анализа не используют). 1-2 см3 фильтрата выпаривают досуха на устройстве для выпаривания или водяной бане, осадок растворяют в 10 см3 буферного раствора. Раствор гидролизата хранят в течение месяца в холодильнике в герметично закрытых пробирках. Испытуемый гидролизат вводят автоматически или при помощи шприца в колонку анализатора аминокислот.
Для идентификации аминокислот и их количественного определения на колонку наносят стандартный раствор аминокислот.
Порядок работы на анализаторах регламентируется инструкцией.
Содержание аминокислот рассчитывают по соотношению площади пиков на хроматограммах стандартного раствора и гидролизата испытуемой пробы.
Содержание аминокислоты (X, г/кг) в воздушно-сухом веществе корма вычисляют по формуле

Х = C*S1*V/S2*m*1000,

где С — концентрация стандартного рабочего раствора, мг/ см3; V — объем гидролизата, см3; S1, S2 — площадь пика аминокислоты в испытуемой пробе и в стандартном растворе соответственно; т — масса навески пробы, мг.
Полученный результат корректируют с учетом разведения гидролизата и уменьшения массы навески после обезжиривания корма.
Для пересчета цистеиновой кислоты и метионинсульфона в цистин и метионин используют переводные коэффициенты 0,710 и 0,023 соответственно.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго. Допустимые расхождения между результатами двух параллельных измерений зависят от среднего арифметического этих измерений (Г) и составляют:
■ для цистина — 0,132 + 0,058х;
■ для метионина — 0,06 + 0,88x.
Допускается проведение анализа без параллельных определений при наличии в партии испытуемых проб стандартных образцов. В этом случае за результат испытания принимают результат единичного определения, если разница между содержанием аминокислоты, полученной в опыте, и указанным в свидетельстве к стандартному образцу находится в пределах погрешности анализа.
Содержание аминокислоты (X1, г/кг) в абсолютно сухом веществе корма вычисляют по формуле
X1 = X/100-W*100,

где X — содержание аминокислоты в испытуемой пробе воздушно-сухого корма, г/кг; W — влажность пробы, %.