Новости
09.12.2016


08.12.2016


08.12.2016


08.12.2016


07.12.2016


24.09.2014

Отбор проб для бактериологического анализа проводят сухим стерильным щупом в сухую стерильную стеклянную банку. Масса точечной пробы должна быть не менее 100 г. Масса объединенной пробы должна быть не менее 500 г.
Объединенную пробу тщательно перемешивают и делят пополам. Каждую часть упаковывают в стерильную стеклянную банку. Одну банку направляют в лабораторию, а другую сохраняют до окончания анализа.
Питательные среды, необходимые для анализа, готовят в соответствии с требованиями нормативной и технической документации.
Подготовка проб. От общей пробы берут навеску массой 50 г и помещают ее в стерильную колбу или стакан гомогенизатора с 450 см3 стерильного физиологического раствора, тщательно перемешивают в течение 30 мин и получают основное десятикратное разведение. После отстаивания в течение 10-15 мин из надосадочного слоя берут пипеткой 1 см3 жидкости, вносят в пробирку с 9 см3 стерильного физиологического раствора и получают стократное разведение. Аналогично готовят последующие разведения.
Определение присутствия бактерий группы кишечной палочки основано на их способности расщеплять маннит и лактозу, образовывать на средах ХБ и Хейфеца кислые продукты, которые изменяют цвет индикаторов, входящих в состав этих сред.
По 1 см3 каждого разведения вносят в пробирки, содержащие по 5 см3 одной из сред: Эйкмана, Кесслера, Булира, Хейфеца, ХБ или КОДА.
Посевы помещают в термостат при температуре 43°С для первых пяти сред и при 37°С для последней.
Через 24 ч учитывают рост на средах Эйкмана, Булира по помутнению и образованию газа, на средах Хейфеца, ХБ и КОДА — по изменению цвета.
Из пробирок, где наблюдается рост микробов, высеивают 0,1-0,2 см3 культуры на плотные дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина) и выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 18-24 ч.
Типичные колонии Е. coli имеют круглую форму, выпуклую или слегка приподнятую в центре поверхность, ровные края; цвет их розовый, красный или малиновый с металлическим блеском или без него на среде Эндо и фиолетовый или черный — на среде Левина.
Выросшие изолированные колонии (не менее 4) пересевают в мясо-пептонный бульон, выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 18-24 ч.
После этого одну часть пробирок используют для приготовления мазков, посева на дифференциально-диагностические среды, заражения мышей, вторую — для приготовления инактивированного антигена.
Изучают морфологические, биохимические и патогенные свойства выделенных культур в целях проведения их идентификации.
Определение бактерий из рода сальмонелл основано на выявлении их характерного роста на селективных средах и установлении ферментативных и серологических свойств.
Навеску массой 50-200 г помещают в колбу, содержащую одну из сред предварительного обогащения (физиологический раствор, пептонная вода), в соотношении 1:5. Содержимое колбы тщательно перемешивают и помещают в термостат при температуре 37°С. Через 16-18 ч производят посевы на любые две основные среды обогащения (селенитовый бульон, магниевая среда, среды Киллиана, Мюллера, Кауфмана) в соотношении 1:5. Культивируют при температуре 37°С.
Через 16-18 ч из обогатительных сред производят посевы на чашки с твердыми дифференциально-диагностическими средами (висмут-сульфит агар, среды Плоскирева или Левина), которые помещают в термостат при температуре 37°С. Чашки просматривают через 24-48 ч.
На висмут-сульфит S. typhi, S. paratyphi А растут в виде мелких, нежных серовато-зеленых колоний с черным центром; S. Cholerae suis — в виде зеленых колоний.
Колонии почти всех других видов сальмонелл значительно крупнее, темно-коричневого цвета с металлическим блеском, окруженные светлым ореолом, цвет участка среды под колонией — черный.
На среде Плоскирева сальмонеллы растут в виде прозрачных или нежно-розовых колоний, на среде Левина — в виде прозрачных, бледных, нежно-розовых или розовато-фиолетовых колоний.
При обнаружении колоний, подозрительных на сальмонеллы, 3-5 из них пересевают на комбинированные среды.
Культуры грамотрицательных подвижных палочек, ферментирующих глюкозу с образованием газа, не ферментирующих лактозу и сахарозу, не разлагающих мочевину и не образующих индол, подвергают серологическому исследованию в реакции агглютинации на стекле с поливалентной адсорбированной 0-сывороткой.
Обнаружение подвижных грамотрицательных палочек (кроме S. pullorum, S. gallinarum), дающих характерный рост на селективных средах, не ферментирующих лактозу и сахарозу, ферментирующих глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа (S. typhi suis не ферментирует маннит), дающих положительную реакцию агглютинации с поливалентной адсорбированной 0-сывороткой, указывает на наличие бактерий из рода сальмонелл.
Определение анаэробных бактерий основано на их способности расти в отсутствие кислорода, на морфологических особенностях, росте на селективных питательных средах, на выявлении патогенности возбудителей путем заражения лабораторных животных.
В пробирки со средами Китта — Тароцци и Вильсона — Блера и в чашки с кровяным агаром по Цейслеру вносят по 1 см3 первых трех разведений испытуемой взвеси, помещают в термостат и инкубируют при температуре 37°С в течение 24-48 ч.
Почернение среды Вильсона — Блера, а также быстрое начало роста на среде Китта — Тароцци при обильном газообразовании является характерным для Clostridium perfringens. На кровяном агаре через 24 ч поверхность колоний С, perfringens слегка выпуклая, округлая или продолговатая, колонии сочные от серого до зеленого цвета, окруженные большой зеленовато-коричневой зоной гемолиза. В мазках, приготовленных из колоний, выросших на кровяном агаре, хорошо выражены капсулы и центрально расположенные крупные овальные споры, ширина которых превышает ширину палочки. Биологическую пробу проводят на морских свинках и белых мышах путем внутрибрюшиного заражения двухсуточной бульонной культурой. При положительном результате подопытные животные гибнут через 2-3 сут.
Рост С. botulinum наблюдается на вторые-третьи сутки и характеризуется помутнением среды Китта — Тароцци, образованием осадка и запахом прогорклого масла. При исследовании на наличие токсина берут навеску продукта массой не менее 50 г, помещают в колбу со стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:4. Подготовленный материал настаивают в течение 2-3 ч, затем центрифугируют и супернатантом заражают животных внутрибрюшинно или подкожно: морских свинок — в дозе 1-2 см3, белых мышей — в дозе 0,2-0,3 см3. Контрольным животным вводят центрифугат, инактивированный на водяной бане при температуре 100°С в течение 30 мин, в тех же дозах.
Биопробу считают положительной, если подопытные животные погибают в течение 2 сут после введения им центрифугата, не подвергнутого кипячению.