Новости
27.03.2024 27.03.2024 26.03.2024 |
Синтетические среды31.01.2014
Синтетические или безбелковые среды готовят из неорганических солей и определенных органических соединений в тех или других комбинациях и концентрациях. Ценность этих сред заключается в том, что они могут быть изготовлены с высокой степенью точности и с учетом потребности того или другого микроба в различных питательных веществах. Изменение состава среды в нужном направлении дает возможность изолировать фитопатогенные бактерии из смесей с другими микробами, делает синтетические среды весьма пригодными для систематического изучения физиологии фитопатогенных бактерий и улучшает диагностику. Эти среды могут быть до некоторой степени и элективными, так как одни фитопатогенные бактерии могут расти на средах, в которых нет органического азота, а другие – только на средах, содержащих белковый азот и т. д. Это относится и к различным источникам углерода. Навески растворяют в 1000 мл дистиллированной воды, фильтруют через бумажный фильтр и дробно стерилизуют текучим паром в течение трех дней. Среда Кларка. Смешивают в ступке 0,5 г пептона, 0,5 г глюкозы, 0,5 г К2НРО4 и растворяют в 80 мл дистиллированной воды при помешивании и подогревании на водяной бане в течение 20 мин. Среду фильтруют через бумажный фильтр, охлаждают до 20° С и доводят объем дистиллированной водой до 1000 мл. Разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют дробно три дня подряд при 100° С. Эта среда применяется для изучения образования ацетилметилкарбинола. К 5 мл четырехсуточной культуры на среде Кларка добавляют пять капель раствора метилрота (0,1 г метилрота растворяют в 300 мл этилового спирта и доводят до 500 мл дистиллированной водой). При сильном кислотообразовании (pH меньше 5,0) появляется красное окрашивание (MR+ ), при слабом (pH больше 5,0) - желтое (MR–). Для определения образования ацетилметилкарбинола по Фогес-Проскауэру к 5 мл пятидневной культуры на среде Кларка добавляют 1 мл 10%-ного водного раствора едкого калия и ставят в термостат при 37° С. В случае образования ацетил-метилкарбинола появляется розовая окраска с желтой флуоресценцией (окраска спиртового раствора эозина), при отрицательном результате окраска отсутствует. Кларк считает, что увеличение аспарагина в этой среде до 5 г дает лучшие результаты. Степень пигментообразования зависит также от pH среды. Хорошие результаты дает pH 7,5–7,6. Замена дистиллированной воды водопроводной дает, увеличение пигментообразования. Для приготовления плотной питательной среды добавляют 1–2% агар-агара. Стерилизуют текучим паром, затем добавляют конго-рот. Фосфорнокислый аммоний может быть и двуосновным. Подщелачивают едким натром. Эта среда служит для замены среды Гиса и для редукции нитратов. Гетероауксин добавляется к среде в концентрации от 1 до 10 частей на 10 млн. частей среды, pH среды 6,4. Среда может служить основой для составления других сред с различными ростовыми веществами или витаминами. Витамины следует добавлять в стерильную среду асептически в виде фильтратов, полученных через бактериальные фильтры. Стерилизовать при 112° С 15 мин. Среда I служит для выяснения способности использования двух форм минерального азота. Средой II пользуются в том случае, если необходим один источник азота. Тогда добавляют к этой среде селитру (КNО3) или аммиачные соли из расчета 1 мг на 1 мл среды. Среда Мак-Нью может быть использована в жидком виде. Изучая биологию штаммов Bact. stewarti, Мак-Нью показал, что одни штаммы обладают способностью редуцировать нитраты в нитриты и хорошо расти на средах, содержащих KNO3, в то время как другие штаммы этой бактерии не росли на указанных средах. Способность использовать неорганический азот зависела от вирулентности культур. Слабо вирулентные культуры становились более вирулентными после роста на синтетической среде. Потребность в аминокислотах у Е. amylovora. Е. amylovora растет на синтетической среде, где в качестве источника азота добавляется аспарагиновая кислота, аспарагин, глутаминовая кислота, глутамин, аланинаспарагин, глицинамид или аммоний. На среде с другими аминокислотами Е. amylovora не растет. Растворы углеводов стерилизуют фильтрацией и добавляют в среду в 1%-ной концентрации. Эмульсию хлопкового масла, не имеющего высокой кислотности, готовят растиранием в ступке или коллоидальной мельнице из 100 мл свежего хлопкового масла, 10 г тонко измельченного гуммиарабика и 400 мл дистиллированной воды. Эмульсия должна иметь шарики диаметром меньше 10 м/с. Затем готовят раствор из агара, триптона и дрожжевого экстракта в 900 мл дистиллированной воды, при нагревании в автоклаве в течение нескольких минут. В полученный раствор добавляют эмульсию хлопкового масла и предварительно отфильтрованный раствор Spirit blue. Смесь доводят до 1000 мл дистиллированной водой и размешивают. Среда стерилизуется в автоклаве 15 мин при 121° С и должна приобрести бледно-лиловый цвет. Хранится она в холодильнике. Колонии бактерий, расщепляющих жир, имеют по краям синюю окраску.
|