Новости

Методы исследования морфологии фитопатогенных бактерий

31.01.2014

После посева кашицы на твердые питательные среды развивающиеся на них бактерии образуют видимые невооруженным глазом скопления, называющиеся колониями и представляющие собой потомство одной или нескольких клеток. Внешние особенности этих колоний, их структура и консистенция имеют большое значение для диагностики бактерий. У каждого вида бактерий свойства колоний определяются внутренними особенностями организма, а также особенностями питательной среды, на которой развивается данная колония.
Колонии, выросшие на агаре в чашке Петри, изучают сначала невооруженным глазом в проходящем свете. Отмечают общий характер роста и число колоний (мало, много), обводя при этом чернилами или восковым карандашом со стороны дна чашки колонии, которые отличаются между собой.
Размеры колоний у разных видов бывают различными – крупные, мелкие, точечные. Их величину измеряют окулярным микрометром, переводя в миллиметры. Точечные колонии бывают меньше 1 мм в диаметре, мелкие – 1–2, средние – 2–4 и крупные – 4–6 мм и более. В некоторых случаях в посевах одного и того же вида можно наблюдать колонии, резко отличающиеся по размерам. Объясняется это неодинаковой скоростью развития отдельных клеток, в результате чего клетки, развивающиеся медленно, попадают в менее благоприятные условия, чем клетки, быстро развивающиеся. Таким образом, внешние условия роста являются определяющим фактором для развития колоний. Это можно подтвердить еще и тем, что вторичные посевы из мелких колоний на пластинки свежей питательной среды неизменно дают колонии нормальных размеров. Однако бывают случаи, когда колонии мелких размеров остаются мелкими и при последующих пересевах. Это явление имеет место и тогда, когда работают с чистыми культурами бактерий, выделенными из одной клетки. Итак, популяция бактерий как бы делится на два типа колоний – обычные и мелкие. При дальнейших пересевах мелкие по-прежнему остаются мелкими, а нормальные могут расщепляться на более крупные и мелкие колонии. Последние называются карликовыми колониями, абортивными, g-колониями. Явление это еще мало изучено и возможно, что причиной его может быть влияние разнородных факторов. Одни авторы считают эти колонии продуктом клеток с ослабленной жизнедеятельностью, другие связывают их появление с существованием фильтрующихся форм бактерий, третьи полагают, что карликовые колонии – это проявление изменчивости бактерий.
Колонии могут иметь правильную форму – круглую и неправильную – амебовидную, розеткообразную, ризоидную или корневидную, гигрозную (рис. 38). Они бывают заметно приподнятыми над средой, выпуклыми или плоскими, плоско-выпуклыми, куполообразными с приподнятой серединой или вдавленным центром (рис. 39). Поверхность колоний бывает гладкой или шероховатой, матовой или блестящей. Край у колоний (рис. 40) может быть ровным, волнистым, дольчатым, глубокоизрезанным, круглозубчатым с небольшими неглубокими зубцами, эрозированным с неровными острыми зубцами, бахромчатым с тонкими часто изогнутыми выростами в виде «локонов».

Методы исследования морфологии фитопатогенных бактерий

Методы исследования морфологии фитопатогенных бактерий

Методы исследования морфологии фитопатогенных бактерий

Структуру колоний изучают под лупой или микроскопом со слабым увеличением, сухой системой при суженной диафрагме или несколько опущенном конденсоре. Рассматривать колонии надо в чашке, помещенной на столике вверх дном. Передвигая ее, отмечают колонии различной структуры – гомогенной, гиалиновой, зернистой, аморфной, неоднородной, различающейся в центре и по периферии. Таким образом, структура бактериальных колоний чрезвычайно разнообразна. По ней отличаются не только различные виды бактерий, но нередко штаммы одного и того же вида образуют колонии различного типа. Чаще всего у одного и того же вида бактерий различают s (гладкие) и r (шероховатые) колонии бактерий. Эти типы колоний характерны для большинства бактерий. Гладкие колонии бывают круглыми, выпуклыми, сочными, влажными, просвечивающимися в проходящем свете, с гладкой блестящей поверхностью и с гладким краем. Шероховатые колонии характеризуются тем, что они становятся менее прозрачными, распластанными, с поверхностью в различной степени шероховатой и зазубренным или волнистым краем, имеют неправильную форму. Наблюдается также образование промежуточных форм, характеризующихся непрозрачными гладкими колониями, называемыми 0-колониями.
Изменение морфологии колоний происходит по формуле: S = 0 = r.
Цвет колоний очень варьирует. Чаще всего они бывают прозрачными, просвечивающимися, полупрозрачными и непрозрачными, а также бесцветными, иногда белыми. Однако встречаются колонии серые, желтые, розовые и других цветов.
Определенный интерес представляет изучение юных колоний бактерий. В литературе высказывается вполне определенное мнение, что микроструктура юных колоний настолько характерна, что может служить опознавательным признаком для отдельных видов бактерий.
Для изучения юных колоний бактерий применяется метод агар-микроскопии. Заключается он в том, что одну-две капли односуточной культуры возбудителя высевают в чашки Петри на твердые питательные среды и помещают в термостат при оптимальной температуре с целью получения отдельных колоний. Через 2, 3, 6, 12, 18, 24 и 36 час инкубации производят просмотр нарастающих колоний при небольшом увеличении. Проведенные наблюдения показали, что колонии наиболее удобны для просмотра в 24-часовом возрасте. К этому времени у них достаточно четко оформлены все морфологические признаки, ясно видно расположение бактериальных клеток.
При изучении фитопатогенных бактерий метод агар-Микроскопии почти не применялся. Он был применен А. Калиненко (1933) при изучении им колоний X. necrosis. Е.С. Гуринович (1949) описала микроструктуру колоний X. malvacearum.X. саmpestris и X. phaseoli. По ее наблюдениям, колонии X. phaseoli были менее слизистые, чем X. campestris, и отличались менее характерным размещением клеток. Таким образом, метод агар- микроскопии может дать дополнительные данные к характеристике фитопатогенных бактерий.


Имя:*
E-Mail:
Комментарий: