На чистое обезжиренное предметное стекло наносят каплю стерильной воды, которая должна равномерно растекаться, не разбиваясь на капельки. Не следует при этом наносить на стекло очень крупные капли воды. В каплю вносят немного исследуемого материала и тщательно его перемешивают, равномерно распределяя тонким слоем. При изготовлении мазков из жидких питательных сред взятый петлей материал не разбавляется водой. Мазки из сред, содержащих сахар, готовятся с добавлением к капле исследуемой жидкости небольшой капельки стерильного обрата или яичного белка.
Приготовленные мазки высушивают обычно при комнатной температуре. Для ускорения высыхания препараты можно подогреть, держа при помощи пинцета Корнэ предметное стекло с мазками, находящимися на их верхней стороне, в теплом воздухе высоко над пламенем горелки (рис. 41).

Осторожное высушивание препятствует быстрому и грубому осаждению белков протоплазмы бактерий и сохраняет этим самым их структуру. Правильно высушенные препараты хорошо фиксируются. Фиксация обеспечивает лучшее прилипание мазка к стеклу и делает его более восприимчивым к окраске. Самым распространенным и пригодным почти во всех случаях является способ фиксации мазков жаром. Для этого стекло с препаратом мазком вверх проводят трижды через пламя спиртовой или газовой горелки. Температура нагретого стекла должна быть такой, чтобы при соприкосновении его с кожей тыльной стороны руки ощущался бы легкий ожог. Не следует перегревать стекло, так как это портит мазок и сильно изменяет структуру бактерий. Фиксация жаром применяется при изучении отношения бактерий к окраске по Граму, выявления кислотоустойчивости и содержания липоидов. Для исследования внутренней структуры бактерий этот метод совершенно непригоден. В таких случаях для фиксации используют различные химические вещества. Наиболее употребляемыми являются следующие приемы фиксации:
- 95%-ным этиловым спиртом в течение 10–20 мин, если спирт более слабый, то время фиксации удлиняется; смесью равных объемов этилового спирта и эфира (жидкость Никифорова); на препарат наносят несколько капель смеси и дают им испариться;
- смесью этилового спирта и формалина (формалина 5 мл, спирта 95 мл) – 5–10 мин;
- безводным метиловым спиртом в течение 2–3 мин; спирт сливают, а препарат высушивают;
- парами формалина или уксусной кислоты – 5–10 мин; парами 1–2%-ного раствора осмиевой кислоты; препарат помещают на подставку в закрытую склянку с осмиевой кислотой и выдерживают 3–5 мин;
- жидкостью Карнуа (96°-ного этилового спирта – 60 мл, хлороформа – 30 мл, ледяной уксусной кислоты – 10 мл) – 15 мин;
- ацетоном в течение 5 мин;
- 10%-ным раствором азотнокислого серебра – 10 мин;
- 1%-ным раствором сулемы в течение 10–15 мин, после чего препарат промывают раствором поваренной соли и водой;
- жидкостью Буэна такого состава: насыщенного водного раствора пикриновой кислоты – 75 мл, формалина неразбавленного – 25 мл и ледяной уксусной кислоты – 5 мл.
Приготовление отпечатков
В связи с возросшим интересом в последние годы к изучению тонкого строения бактерий были разработаны разнообразные и эффективные способы фиксации бактерий, нанесенные на стекло в виде отпечатков. В таком препарате-отпечатке сохраняется более или менее точно взаимное расположение клеток в бактериальном газоне. Метод отпечатков заключается в том, что из агара в чашке Петри с засеянными на нем бактериями вырезают блок и переносят на предметное стекло. Затем берут обезжиренное предметное стекло и прикладывают его к поверхности блока, засеянного бактериями, получая таким образом первый отпечаток. Отпечатки делают до тех пор, пока не истощится слой бактерий на блоке, располагая их слева направо, начиная от левой короткой грани стекла. Затем дают отпечаткам подсохнуть и помещают стекло в жидкость Карнуа для фиксации. Хорошие результаты дает также фиксация осмиевой кислоты. В литературе описаны и другие методы фиксации отпечатков.

---

Имя:*
E-Mail:
Комментарий:

Добавить