Окраска капсул

31.01.2014

Капсулы, представляющие собой скопление слизи вокруг тел бактерий, образуются при избытке в питательной среде источников углеводного питания и недостатке азотистого.
Наличие капсул легко распознается по расположению клеток на неокрашенных препаратах. Бескапсульные клетки плотно прилегают одна к другой, почти без просветов между ними. Капсульные бактерии, наоборот, нигде не прикасаются одна к другой, располагаясь на определенном расстоянии друг от друга. Такой характер расположения зависит от присутствия слизистых капсул, невидимых при обычной окраске препарата.
Для выявления капсул применяются различные специальные методы обработки препаратов. Приводим некоторые из них.
Негативный метод Бурри. Исследование капсул бактерий при помощи жидкой туши по методу Бурри считается классическим. Состоит он в следующем: смешивают одну часть туши с девятью частями дистиллированной воды и стерилизуют при 110° С 30 мин в пробирках, закрытых ватными пробками. Вместо стерилизации можно добавлять к разведенной туши несколько капель формалина. Подготовленную указанным способом тушь надо сохранять в течение двух недель, пока все взмученные частицы не осядут на дно. Для приготовления препарата берут осторожно только верхнюю часть отстоявшейся жидкости.
Каплю туши помещают на предметное стекло и смешивают с каплей жидкости, содержащей бактерии, и тонким слоем при помощи покровного стекла распределяют по поверхности предметного стекла. После того как препарат высохнет, его рассматривают под микроскопом с применением иммерсии. На темном фоне ясно видны неокрашенные капсулы и тела бактерий.
В литературе описано применение жидкой туши в комбинации с некоторыми красками. Например, на предметном стекле в капле фуксина Циля (разведенного пополам водой), конго- красного, нигрозина размешивают петлю с исследуемой культурой. Через 2–3 мин добавляют каплю жидкой туши, которую тщательно размазывают по стеклу. На темном фоне выступают бесцветные капсулы и ярко окрашенные бактерии.
Вместо туши для негативных препаратов типа Бурри могут быть использованы: 10%-ный водный раствор опал-бляу (Эпштейн) или 3%-ный раствор конго-рот, 10%-ный раствор нигрозина или 2%-ный раствор колларгола.
Способ Клетта. Препарат окрашивается кипящим раствором метиленовой сини (1 часть краски + 10 частей спирта + 100 частей воды). Затем препарат промывают водой и дополнительно окрашивают в течение 5 мин раствором фуксина (1 часть краски + 10 частей спирта + 100 частей воды). Тела бактерий окрашиваются в синий цвет, капсулы – в розовый.
Метод Баха, модифицированный В.Г. Дроботько. На предметном стекле в капле 3%-ного водного раствора конго-красного смешивают культуру бактерий и делают обычный мазок. Мазок просушивают при комнатной температуре без фиксации. Затем мазки обрабатывают солянокислым спиртовым раствором кислого фуксина (фуксина 10 г, спирта 100 мл и соляной кислоты 3 мл) в течение 20–30 сек, после чего промывают водой, высушивают и исследуют.