Выделение клеток при помощи капиллярного микроселектора МС-5 Перфильева

31.01.2014

Микроселектор МС-5 служит для изоляции отдельных клеток под контролем микроскопа. Микроселектор крепится на столике микроскопа и состоит из следующих частей: 1) снаряда, представляющего собой стеклянный микрокапилляр квадратного поперечного сечения, толщиной 40–70 мк и длиной 18– 20 см, заключенного в гильзу – металлический раздвижной трубчатый футляр; 2) микроселекторного столика – прямоугольной никеллированной пластины с прорезями; 3) зажимного приспособления для вычленения участков капилляра; 4) приспособления для введения капилляра и шомпольного устройства для чистки прибора; 5) приспособления для инфицирования снаряда; 6) приемника, служащего для переноса вычлененного участка капилляра в питательную среду; 7) защитной камеры из латуни со стеклянной крышкой, защищающей приемник от инфекции.
Выделение микроорганизмов в одноклеточные культуры сводится к ряду последовательных манипуляций. Прежде всего закладывают снаряд (капилляр) в гильзу, заворачивают их вместе или раздельно в тонкую бумагу и стерилизуют в течение 30 мин при 1,5–2 атм. Затем на приборе устанавливают приемник, капилляр которого втягивают в трубчатый футляр. Окончательная подготовка приемника к прибору осуществляется под малым увеличением микроскопа.
На приборе закрепляют гильзы со снарядом, который под контролем невооруженного глаза вводят в прибор при помощи подвижного зажимного приспособления. Микробную суспензию для заполнения инфекторного капилляра готовят на желатине или других веществах, повышающих вязкость воды. Рекомендуется раствор желатины от 5 до 20%. Состав и концентрация других веществ определяются потребностями микроорганизмов (5–10%-ный раствор сахара, сусло, среда Чапека). Поскольку объем канала капилляра очень мал, то концентрация микробной взвеси должна быть достаточно высокой.
Прикоснувшись концом стерильного инфекторного капилляра к микробной взвеси, всасывают последнюю в его канал. За втягиванием клеток в канал наблюдают под большим увеличением микроскопа. После заполнения снаряда инфектор убирают с прибора, а конец снаряда, ранее находившийся в инфекторе, обламывают с целью предотвращения загрязнения. Затем участок снаряда, содержащий одну клетку, устанавливают в центре поля зрения микроскопа и одновременно в центре пересечения каналов зажимного приспособления. Нерезким нажимом на головку рукоятки ударника выламывают избранный участок с клеткой. Обломок капилляра попадает в приемник, откуда его немедленно следует перенести в питательную среду. Для этого капилляр приемника втягивают в защитную трубку и при помощи поршня выталкивают в твердую или жидкую питательную среду в чашках Петри, пробирках, колбах или специальных микрокюветах, допускающих наблюдение под большим увеличением микроскопа. После вычленения участка капилляра в поперечном канале остаются обломки микрокапилляра, которые следует удалить за пределы прибора при помощи рабочего конца снаряда или шомпола.
Этот прибор может быть использован для выделения чистых культур самых мелких микроорганизмов.
Работа с микроселектором требует тщательного соблюдения правил обращения, а также условий хранения прибора и особенно его хрупких стеклянных принадлежностей – капилляров, приемника, покровных стекол для зажима, защитной камеры и др.