Новости
13.11.2018


10.11.2018


10.11.2018


09.11.2018


07.11.2018


05.11.2018


04.11.2018


03.11.2018


03.11.2018


01.11.2018


01.11.2018


01.11.2018


01.11.2018


31.10.2018


31.10.2018


31.10.2018


30.10.2018


24.10.2018


23.10.2018


23.10.2018


18.10.2018


17.10.2018


12.10.2018



01.02.2014

Общее количество бактерий можно определить путем подсчета клеток в окрашенном мазке, приготовленном из точно отмеренного объема бактериальной взвеси. Зная площадь поля зрения микроскопа и площадь мазка, можно подсчитать, какое количество бактерий было в мазке и соответствующем объеме среды. Для удобства можно пользоваться стандартными предметными стеклами с выгравированными делениями в счетных камерах. Подсчет бактерий в счетных камерах производится в темном поле зрения (обычном микроскопе) или при помощи фазовоконтрастной установки.
Метод Фихмана и Брауде
Бактериальная взвесь перед подсчетом клеток в счетной камере должна быть тщательно перемешана (на электромагнитной мешалке). После этого ее в несколько раз (20–30) разводят в физиологическом растворе или в стерильной водопроводной воде. Затем этой взвесью заполняют счетную камеру Бюргера В, глубина которой составляет 0,01 мм. Подсчет количества бактерий следует производить не менее чем в десяти камерах. В каждой камере необходимо подсчитать количество клеток в 25 малых квадратах, расположенных по диагонали. Полученные результаты обрабатываются по методу вариационной статистики с целью определения величины стандартного отклонения и средней ошибки.
Подсчет гипертрофированных клеток
Подсчет живых клеток можно произвести также при помощи мочевины, внесенной непосредственно в исследуемую суспензию. Гипертрофированные клетки вследствие воздействия мочевины легко различаются при просмотре окрашенных препаратов.
Подсчет количества живых клеток методом разведения
Наиболее распространенным методом определения количества живых клеток в культуре является метод посева соответственно разведенной в определенном объеме бактериальной культуры на плотную питательную среду в чашки Петри. Бактериальную суспензию разводят в стерильной водопроводной воде или в физиологическом растворе. При посеве взвеси на поверхность питательного агара посевной материал тщательно и равномерно распределяют шпателем по поверхности агаровой пластинки. При посеве в глубину (среды) в стерильную чашку вносят вначале 1 мл посевного материала, заливают ее расплавленным и остуженным до 45–50° С агаром и размешивают содержимое чашки легким покачиванием. Засеянные чашки оставляют в термостате при оптимальной для данного вида температуре. Затем подсчитывают количество выросших колоний. Сделав соответствующие расчеты, определяют число живых клеток в 1 мл растущей культуры.
Метод Сатианарьяна и др.
В чашки Петри с агаром при помощи микропипетки наносят по пять капель объемом по 0,01 мл из различных разведений микробной взвеси. После инкубации подсчитывают колонии, выросшие на месте нанесения каждой капли, умножают на 20 и на величину разведения и определяют число микробов в 1 мл исследуемой суспензии. Посевы из серии разведений дают правильные геометрические ряды чисел колоний. При исследовании аэробных микроорганизмов в чистых и смешанных культурах метод более удобен, быстр и экономичен, чем определение количества бактерий методом разливок, хотя при этом возможны такие же ошибки, как и при использовании метода разливок. Во-первых, источником ошибки является то, что образование колоний происходит не от одной, а от двух и более скопившихся клеток, во-вторых, ошибки могут быть связаны с различными неточностями при приготовлении разведения.
Один из указанных недостатков может быть устранен при использовании метода Поуэлла (1956), согласно которому посев разведенной культуры следует производить на целлофановую мембрану с нанесенной на ее поверхности сеткой с делениями. Мембрану помещают на поверхности питательной среды и сразу же после посева (при микроскопировании) определяют количество единичных клеток в квадратах и их скопления. То же проделывают через 6 час инкубации. Разницу в количестве клеточных скоплений принимают в основу подсчета живых клеток.
Метод предельных разведений
Подсчет жизнеспособных клеток также можно произвести по методу предельных разведений при помощи посева определенного объема различных разведений в ряд пробирок с жидкой питательной средой. При наличии роста в одних пробирках и отсутствии его в пробирках с большим разведением внесенного посевного материала судят об исходном содержании клеток в 1 мл среды, допуская, что в последнюю пробирку, в которой обнаруживался рост бактерий, была высеяна одна жизнеспособная клетка. Этот метод может давать большие вариации, поэтому нужно пользоваться большим числом повторностей.


Имя:*
E-Mail:
Комментарий: