Определение количества клеток измерением плотности бактериальной популяции

01.02.2014

Оптическая плотность бактериальной суспензии выражается произведением величины клеток на общее число клеток. Существует несколько способов измерения концентрации клеток по мутности бактериальной взвеси.
Определение плотности бактериальной взвеси при использовании стандартов мутности. Наиболее простой и распространенный метод – сравнение мутности исследуемого образца и ряда стандартных эталонов с заведомо известным содержанием клеток. Определение мутности в этом случае производится при помощи нефелометра. При этом необходимо, чтобы внутренний диаметр, толщина и цвет стекла сравниваемых пробирок были одинаковыми. Цвет стандартной и определяемой суспензии также должен быть одинаковым.
Кроме стандартов мутности с бактериальной взвесью могут быть применены так называемые стеклянные стандарты, выпускаемые Государственным контрольным институтом вакцин и сывороток им. Л.А. Тарасевича. Для изготовления стеклянных стандартов используют взвесь мельчайших частиц пирексстекла в дистиллированной воде. Степень мутности таких стандартов фотометрически приспособлена к мутности взвеси бактерий определенной величины. Стеклянные стандарты обладают большой стабильностью и длительным сроком годности.
Определение плотности бактериальной взвеси при помощи фотоэлектрических колориметров. Более объективные, точные и быстрые результаты дает применение методов определения количества микробных тел с использованием фотоэлектрических колориметров, основанных на применении фотоэлементов. В Советском Союзе и за рубежом выпускают такие фотоэлектрические приборы – ФНК, ФЭК-Н, ФЭК-М, абсорбциометр Спеккера, фотоэлектрический колориметр Люметрона, колориметр Киетт-Саммерсона, спектрофотометр Бекмана и др.
Плотность размножающейся культуры может быть с успехом определена при использовании фотоэлектрических приборов, если предварительно будет подготовлена для данного вида калибровочная кривая (в соответствии со шкалой мутности общего стандарта) зависимости показаний шкалы реохорда фотоколориметра от числа микробных клеток. Установлено, что различная величина бактериальных клеток у разных видов может служить источником ошибки при определении количества бактерий по мутности суспензии, поскольку светопоглощение и светорассеивание зависят от величины и формы микробов. Поэтому сравнимыми могут быть лишь бактериальные суспензии с клетками одинаковой величины.
Для построения калибровочной кривой на оси ординат отмечают количество микробов в 1 мл жидкой питательной среды, определяемое каким-либо методом (подсчета клеток в счетной камере, чашечным или др.). На оси абсцисс – значения шкалы реохорда при определении мутности той же взвеси микробов. Контролем должна служить пробирка со стерильной питательной средой, на которой проводятся все опыты. В результате получается ряд точек, соответствующих различным содержаниям микробов. Затем точки соединяют плавной кривой, которая и служит для последующего определения количества тех же микробов в среде по показаниям фотоколориметра.
Точность определения количества микробов в пробирках по мутности обусловливается в известной мере точностью построения стандартных кривых, т. е. зависит от точности общепринятых методов определения количества микробов, при помощи которых строятся эти кривые.