В основе этого метода лежит различная адсорбция метиленового синего живыми и мертвыми клетками. Бактериальная
суспензия обрабатывается раствором, содержащим КН2РO4 – 27,2 г/л, Na2HPO4 – 0,071 г/л и метиленовый синий в количестве от 60 до 200 мг/л в зависимости от организма. Концентрация метиленового синего определяется колориметрически. Процент мертвых клеток (Р) вычисляется по формуле

где Ci – начальная концентрация красителя, Cf – концентрация красителя в опытной суспензии, Сf100) – концентрация красителя при условии, что все клетки мертвые. Метод дает удовлетворительные результаты при подборе для каждого организма соответствующей концентрации красителя и густоты суспензии.
Простой метод прямого счета бактерий
0,01 мл бактериальной суспензии наносят на покровное стекло размером 20x20 мм. Сверху кладут другое покровное стекло так, чтобы между ними образовалась пленка жидкости. Покровные стекла помещают на предметное стекло, края их обмазывают вазелином, чтобы предотвратить испарение воды. Подсчитывают число клеток в восьми–десяти полях зрения. Количество клеток в 1 мл вычисляют по формуле N(0,01)xS(S0), где N – среднее число клеток в одном поле зрения, S – площадь покровного стекла, S0 – площадь поля зрения микроскопа.
Метод Гольдфарба и др.
М.Л. Гольдфарб с сотрудниками разработали и испытали прибор, предназначенный для автоматической регистрации процесса роста и размножения бактерий по изменению оптической плотности среды культивирования при энергичном ее перемешивании без нарушения стерильности. Прибор состоит из трех основных узлов: осветительного устройства с исследуемой микробной взвесью, пульта управления и записывающего миллиамперметра. Прибор позволяет регистрировать изменение оптической плотности взвеси в диапазоне 20–500 млн. бактериальных клеток в 1 мл среды. В конструкции прибора предусмотрена автоматическая регистрация времени с получасовыми интервалами. Этот прибор можно применять для регистрации роста и размножения бактерий в условиях стационарного выращивания с целью использования влияния на эти процессы различных факторов (антибиотики, фаг, температура, различные физические, химические и биологические факторы).
Выявление живых бактерий при помощи солей тетразолия
Определение количества живых и мертвых бактерий в суспензии может быть осуществлено при помощи солей тетразолия. Этот метод основан на способности живых клеток восстанавливать соли тетразолия в окрашенный нерастворимый в воде формазан. Установлено, что реакция восстановления солей тетразолия в формазан происходит в определенных участках клетки (митохондриях), обладающих высокой дегидрогеназной активностью. Сущность метода заключается в следующем: бактерии выращивают на косом питательном агаре, смывают 5 мл стерильного питательного бульона и 1 мл полученной суспензии засевают в питательный бульон с солью тетразолия (к 100 мл бульона добавляют 1 г 2-, 3-, 5-трифенилтетразолийхлорида). Через 1 час после инкубации при оптимальной температуре добавляют 4%-ный формалин, который убивает и фиксирует бактерии. На эффективность солей тетразолия при окрашивании бактерий формалин не оказывает влияния. Убитые и фиксированные клетки подсчитываются в обычном световом микроскопе. Живые бактерии имеют красноватый цвет, а мертвые не окрашиваются.

---

Имя:*
E-Mail:
Комментарий:

Добавить