Новости

Флуорохромирование люминесцирующими красителями

01.02.2014

Для различия живых и мертвых бактерий наилучшими флуорохромами из числа люминесцирующих красителей являются примулин, тиазоловый желтый и бриллиант-дианиновый зеленый в разведении 1 : 100000. При флуорохромировании этими красителями мертвые клетки очень ярко люминесцируют. Живые бактерии видны лишь в виде тусклых теней. Для учета в одном и том же поле зрения живых и мертвых клеток Мейсель и другие (1961) рекомендуют такие приемы.
1. Одно и то же поле зрения можно рассматривать сначала при люминесцентном освещении, а затем при условиях фазового контраста. Для этой цели применяется обычный биологический микроскоп, снабженный сильным источником света (пригодным для возбуждения люминесценции), двумя скрещенными светофильтрами (возбуждающим, помещенным между источником света и микроскопом и защитным – в тубусе и окуляре) и фазовоконтрастным устройством. Такой микроскоп попеременно работает то как люминесцентный (фазовая диафрагма ставится на 0), то как фазово-контрастный (устанавливается соответствующая объективу фазовая диафрагма и убирается возбуждающийся светофильтр; его тогда заменяют зеленым или матовым).
Еще более удобным для такого наблюдения является микроскоп, снабженный люминесцентным опак-иллюминатором Брумберга (ОИ-17, МЛ-1, MЛ-2). В этом случае люминесценция препарата возбуждается светом, падающим сверху через объектив микроскопа. Нижнее освещение используется для фазового контраста. Благодаря этому возникает возможность одновременного наблюдения в люминесцентном свете и в условиях фазового контраста.
2. Флуорохромированные препараты помещают на нагревательный столик и подсчитывают число ярко светящихся мертвых клеток в люминесцентном свете при комнатной температуре. Затем объектив микроскопа приподнимают во избежание его повреждения и включают нагревательный столик, чтобы повысить температуру препарата до 80–90° С. В результате нагрева живые клетки погибают и начинают ярко светиться, что позволяет учесть общее количество бактерий.


Имя:*
E-Mail:
Комментарий: