Новости

Липаза

01.02.2014

Липаза катализирует гидролиз липидов. При этом образуется трехатомный спирт (глицерин) и жирная органическая кислота. Оптимальные pH для проявления действия липазы бактерий находятся в пределах 8. В связи с этим для выявления липолитической активности впервые исследуемых объектов определение ведут как в кислой, так и в щелочной среде. С этой целью используются специальные буферные смеси. Буферную смесь I (кислая) с pH 4,7: 250 мл нормального раствора уксусной кислоты смешивают с 25 мл нормального раствора уксусно-аммиачной соли и доводят до 1 л бидистиллированной водой. Буферную смесь II (щелочная) с pH 8,9 : 135 мл нормального раствора хлористого аммония смешивают с 66 мл нормального раствора гидроокиси аммония.
При определении активности липазы используют метод прямого титрования растворов щелочи, освобождающихся жирных кислот вследствие действия фермента на жир. В качестве субстрата применяют оливковое или какое-либо другое растительное масло.
Определение фермента производят следующим образом. В сухую колбу емкостью 20–30 мл с притертой пробкой вносят пипеткой 2,7 мл (2,5 г) нейтрального оливкового масла, прибавляют 2 мл соответствующей буферной смеси и сильно встряхивают. Туда же прибавляют 3 мл ферментного препарата из изучаемых бактерий, встряхивают в течение 2–3-мин на качалке и ставят в термостат при 30° С на различные сроки в зависимости от активности фермента. При продолжительности опыта в течение часа пробу все время встряхивают. По окончании экспозиции содержимое склянки смывают 30 мл 96°-ного спирта в коническую колбу, куда прибавляют 25 мл эфира и титруют 0,1-н. КОН с индикатором фенолфталеином. Контрольные образцы титруют сразу же или ставят опыт с прокипяченным ферментным препаратом. Из результатов титрования опытных проб вычитают результат титрования контрольных. Активность липазы выражают в миллилитрах 0,1-н. КОН, использованной на титрование образовавшихся кислот.


Имя:*
E-Mail:
Комментарий: