Для выделения бактериофага из различных органов пораженных растений применяется следующая методика: кусочки пораженных тканей тщательно промывают текучей водопроводной водой, а потом несколько раз ополаскивают стерильной водой. Затем эти кусочки тщательно растирают в стерильной ступке. Полученную кашицу погружают в пробирку, содержащую 10 мл оптимальной для роста возбудителе бактериоза жидкой питательной среды. Такой средой может быть мясопептонный бульон или хорошо подобранная синтетическая среда. Одновременно для выделения возбудителя бактериоза делается посев в чашки Петри с твердой питательной средой (рис. 58). Если в пораженных тканях растений имеется бактериофаг, то в пробирках начинается просветление, свидетельствующее о лизисе бактерий. Это явление может происходить через сутки и через более длительный период времени, связанный с темпами нарастания культуры бактерий. В некоторых случаях лизис может наблюдаться даже на десятые сутки. После этого жидкую питательную среду в пробирке фильтруют через бактериальные фильтры. Лизирующую способность фильтрата испытывают на культуре возбудителя бактериоза, выделенного из того же образца и еще на нескольких, имеющихся в лаборатории других штаммах этого же возбудителя. Если при первом испытании окажется, что полученный бактериофаг обладает очень слабым действием либо он даже отсутствует, то ставят опыты по усилению бактериофага путем его повторного пассирования на чувствительность к нему культуры бактерий. Наряду с этим пытаются его выделить из других образцов пораженных растений.

Бактериофаг к фитопатогенным бактериям может быть выделен из почв полей, где произрастают различные сельскохозяйственные растения, из поливных вод оросительных систем, из рек и ручьев. Нельзя при этом не отметить значительное количество положительных случаев выделения фагов к фитопатогенным бактериям при использовании, например, воды из р. Лыбедь, протекающей на территории Киева. Применявшаяся при этом методика заключалась в следующем. К 8 мл бульона Готтингера добавляли 2 мл профильтрованной через фильтр Зейтца воды, а также 18-часовую культуру возбудителя бактериоза. Смесь помещали в термостат при температуре оптимальной для роста испытуемого вида фитопатогенной бактерии, через сутки фильтровали и полученный фильтрат испытывали на наличие фага. Нельзя не отметить, что появление фага можно было наблюдать уже после первого-второго пассажа. Путем дальнейшего пассирования активность такого фага можно было постепенно усилить.

---

Имя:*
E-Mail:
Комментарий:

Добавить