Новости
13.11.2018


10.11.2018


10.11.2018


09.11.2018


07.11.2018


05.11.2018


04.11.2018


03.11.2018


03.11.2018


01.11.2018


01.11.2018


01.11.2018


01.11.2018


31.10.2018


31.10.2018


31.10.2018


30.10.2018


24.10.2018


23.10.2018


23.10.2018


18.10.2018


17.10.2018


12.10.2018



03.02.2014

Отношение к кислороду. Для установления отношения изучаемых бактерий к кислороду производится посев их в агаровые или желатиновые столбики в пробирках уколом. Аэробы развиваются в верхней части укола, факультативные анаэробы – в средней и анаэробы – в нижней части укола. Кроме того, определение отношения к кислороду может быть осуществлено и другими методами – химическими, физическими и биологическими, благодаря которым создаются условия анаэробиоза.
Химические способы. В качестве действующего вещества, связывающего свободный кислород в замкнутом от внешней атмосферы пространстве над поверхностью питательной среды, используются гипосульфит (NаS2О3), раствор сернокислого железа в 10%-ном едком калии и щелочной раствор пирогаллола, получивший наибольшее распространение.
Методика с применением пирогаллола сводится к следующему: на 1 г пирогаллола берут 1 мл 10%-ного раствора едкого калия. Это количество вещества способно связывать кислород в объеме воздуха около 200 мл. Используют этот раствор различными способами.
1. Ватную пробку пробирки с изучаемой культурой подрезывают и проталкивают несколько внутрь, смочив ее раствором пирогаллола (0,5–1 мл). Доступ воздуха прекращают путем закупоривания резиновой пробкой или резиновым колпачком.
2. Пробирку с культурой помещают в специальную пробирку Бухнера или Ру, куда предварительно насыпают 1 г пирогаллола, затем по стенке пробирки приливают 1 мл 10%-ного содового раствора, закрывают пробирку резиновой пробкой и заливают парафином или воском. Находящийся на дне пирогаллол поглощает кислород воздуха из наружной пробирки и через ватную пробку кислород воздуха, находящийся над питательной средой, а также кислород самой питательной среды. При поглощении кислорода бесцветный раствор темнеет, буреет.
Физические методы. 1. Удаление воздуха из питательных сред перед засевом кипячением в водяной бане в течение 15 мин и последующим быстрым охлаждением до 45–60° С.
С целью предотвращения попадания воздуха вновь в среду пробирки запаивают и заливают стерильным парафиновым маслом.
2. Удаление воздуха при помощи специальных приборов – анаэростатов, представляющих собой металлическую коробку прямоугольной или цилиндрической формы. Коробка имеет крышку на резиновой прокладке, а также металлический кран, который присоединяется к насосу. После выкачивания воздуха коробку помещают в термостат. В новых системах анаэростатов, кроме выкачивания воздуха, возможно также регулирование температуры. В случае отсутствия анаэростатов используют эксикаторы.
Биологический метод. Применяется для изучения поверхностного роста анаэробов. Для этого чашку Гельденрейха, разделенную на две части, вырезанной полоской агара, засевают В. prodigiosum и изучаемыми бактериями. В. prodigiosum, являющаяся аэробной бактерией, энергично поглощает кислород, создавая таким образом благоприятные условия для анаэробных микроорганизмов. Для изоляции внутреннего пространства чашки от внешней атмосферы края ее заливают воском и замазывают пластилином.

Влияние температуры
Жизнедеятельность каждого микроорганизма определяется температурными границами, за пределами которых она, как правило, прекращается. Эту температурную зависимость обычно выражают тремя основными точками: оптимум, максимум и минимум. Оптимальной является та температура, при которой определенный вид бактерий развивается наиболее интенсивно. Для большинства фитопатогенных бактерий она лежит в пределах 25–27° С. Максимальной называется наивысшая температура, при которой еще наблюдается развитие микробов и выше которой оно уже прекращается (46–51° С). Минимальной обозначается та предельно низкая температура, ниже которой развитие микроорганизмов прекращается.
Большое практическое значение имеет температура, лежащая за пределами максимума, при которой наступает гибель бактерий. Губительное влияние высоких температур послужило обоснованием для разработки методов стерилизации питательных сред, посуды, рабочего инвентаря и др.
Низкие температуры не убивают бактерий, но вызывают временную задержку в их развитии. Известно, что некоторые бактерии сохраняют свою жизнеспособность даже после обработки в течение нескольких часов жидким водородом (температура минус 252°).

Высушивание
Высушивание микроорганизмов может быть использовано для практических целей. В настоящее время метод высушивания применяется для сохранения культур бактерий и сывороток к ним. Это достигается следующими, наиболее употребляемыми способами: высушивание под вакуумом при наличии влагопоглощающего вещества и лиофильное высушивание под вакуумом с предварительным замораживанием до –78° С.

Влияние света
За исключением небольшой группы бактерий (пурпурные и зеленые серобактерии) все остальные для своего развития не нуждаются в свете. Рассеянный свет не оказывает на них губительного влияния, но постепенно тормозит развитие. Наиболее губительным действием обладают прямые солнечные лучи, благодаря их фотохимическому действию.
Влияние ультрафиолетовых лучей. Установлено, что бактерицидность света зависит от действия ультрафиолетовых лучей; видимый свет этим действием не обладает. Бактерицидность ультрафиолетовых лучей используется на практике для стерилизации помещений и материалов. Для этой цели служат ртутно-кварцевые лампы и другие источники ультрафиолетовых лучей.
Бактерицидное действие солнечного света может быть продемонстрировано опытом, проведенным Бухнером еще в 1892 г. Для этого поверхность агара засевали густой взвесью Salmonella thyphosa или другим видом бактерий. Наклеив на чашку черные буквы, подвергали ее действию прямого солнечного света в течение 1–1,5 час. Затем чашку помещали в термостат на один-два дня. Рост культуры в виде слизистого налета появлялся только на тех местах питательной среды, которые были защищены черными буквами от действия солнечных лучей. Остальная часть агара оставалась прозрачной вследствие гибели бактерий, подвергнутых действию ультрафиолетовых лучей.
Фитопатогенные бактерии, находящиеся на надземных органах растений, подвергаются воздействию лучей солнечного спектра, наиболее активной частью которого являются ультрафиолетовые лучи. Последние в одних дозах оказывают бактерицидное действие на патогенные и другие бактерии, в других – вызывают глубокие изменения их биологических свойств. Слабые дозы ультрафиолетового облучения вызывают стимуляцию роста бактерий. В связи с этим ультрафиолетовые лучи, могут быть использованы при изучении устойчивости фитопатогенных бактерий к определенным дозам этого излучения, а также с целью изучения изменчивости бактерий и получения биохимических и других вариантов возбудителей. Изучение влияния ультрафиолетовых лучей на бактерии проводят при помощи искусственных источников ультрафиолетового излучения. В настоящее время отечественной промышленностью выпускаются ртутно-кварцевые лампы низкого (типа БУВ) и высокого (типа ПРК) давления. Наиболее пригодными являются лампы низкого давления, излучающие максимум энергии в области 253,7 ммк.
Для изучения степени устойчивости фитопатогенных бактерий к ультрафиолетовому излучению объект исследования подвергают облучению при различных экспозициях с учетом расстояния между объектом и источником излучения. Так, И.В. Воронкевич и Л.Н. Овечникова (1962) проводили облучение бактерий лампой БУВ-15 на расстоянии 23 см. Излучаемая энергия при этом равнялась 3,8 эрг/мм2 в 1 сек. Подвергая облучению объект в течение различного времени (12,5; 25; 50; 100 и 200 сек), получали соответственно различные дозы облучения: 47,5; 95; 190; 380 и 760 эрг/мм2. Бактериальную суспензию для облучения готовили из односуточной культуры в концентрации 1–5 • 10в6 клеток в 1 мл. Капли приготовленной суспензии помещали на покровные стекла и. облучали. Учет выживших клеток производили путем подсчета выросших колоний после инкубации определенного количества облученного материала, посеянного на агаровой пластинке.
При изучении изменчивости бактерий опытным путем устанавливают расстояние между объектом и источником излучения и длительностью облучения с целью получения нелетальных доз по отношению к определенному виду или штамму бактерий. Для примера приведем способ получения биохимических вариантов Е. aroideae (Townsend) Holland. Суспензию бактерий, состоящую из 1–4•10в4 клеток в 1 мл готовят на физиологическом растворе из односуточной культуры, выращенной на агаре при 27° С. 10 мл этой суспензии помещают в стерильные чашки Петри и облучают при легком покачивании. Доза облучения составляет 300 эрг/мм2. Образцы облученных клеток (по 0,1 мл) высевают в пробирки с питательным бульоном, содержащим 0,1% дрожжевого экстракта и оставляют на 24 час при 27° С при постоянном покачивании с соответствующей предосторожностью против фотопротиводействия. Затем культуры центрифугируют, промывают физиологическим раствором, ресуспендируют в среде, содержащей 300 ед/мл пенициллина, и инкубируют в течение суток, после чего рассевают в чашках Петри на агаровую среду с дрожжевым экстрактом. При наличии этого экстракта вырастают колонии, плохо развивающиеся на среде без его добавления. У выделенных в большом количестве культур изучают потребность в различных элементах питания, вирулентность и другие свойства.
Под действием ультрафиолетового облучения получены авирулентные варианты В. tumefaciens, P. marginalis, P. angulata, P. tabaci, P. phaseolicola, P. glicinea, P. tomato, P. coronafaciens, X. oryzae и др.
Ультрафиолетовые лучи можно использовать также с целью получения дополнительной характеристики для дифференциации и идентификации фитопатогенных бактерий по их способности светиться в ультрафиолетовом свете. Для определения характера свечения в отделе фитопатогенных бактерий Института микробиологии и вирусологии АН УССР применяется следующая методика: культуры возбудителей бактериозов засевают в чистые одинакового диаметра пробирки с определенной синтетической средой из расчета 500 млн. клеток на 1 мл жидкости. Затем помещают их на сутки в термостат при температуре 25–27° С. Естественная флуоресценция бактерий и среды, на которой их выращивают, наиболее ярко проявляется при применении лучей длиной волны 365 ммк через трое – семь суток. Наблюдения проводят, однако, в течение месяца и больше. Для изучения характера свечения, например, у P. maculicola (Me Culloch) Stevens, можно рекомендовать среду Чапека и Лиске. На этой среде бактерии светятся голубым, сиреневым или желто-зеленым цветом.
Для дифференциации некоторых видов бактерий рода Erwinia пригодна среда Ферми. Е. aroideae на этой среде светится желтовато-зеленым, а Е. carotovora – голубовато-синим. На среде Кларка можно отметить различие в цвете свечения у возбудителей бактериозов сои P. solanacearum f. sojae и P. glicinea. Первая из указанных бактерий вызывает зеленовато-желтое свечение, вторая – сиренево-фиолетовое.
Влияние рентгеновских и других лучей. Влияние на бактерии различных видов лучистой энергии изучено еще недостаточно. Данные, имеющиеся о влиянии рентгеновских лучей на бактерии, весьма разноречивы, хотя в некоторых случаях отмечено их бактерицидное действие на фитопатогенные бактерии.
Р. Рассак, В. Бруккер (1962) В. tumefaciens подвергали рентгенооблучению три раза в неделю (300 кюри за одну неделю). Общая доза составляла 7800 кюри. Способность полученных вариантов бактерий вызывать быстрорастущие опухоли у томатов значительно ослабевала.
Для облучения бактерий х-лучами может применяться рентгеновский аппарат РУМ-7 и БФ (близкофокусные рентгеновские трубки).
Обработка клубней картофеля гамма-лучами в дозах от 17700 до 477 400 рад, зараженного Е. carotovora, не предотвращает гнили картофеля. Более высокие дозы вызывают изменение состояния тканей клубней картофеля. Для облучения могут быть использованы установки с зарядом радиоактивного кобальта (Со60) разной мощности.
Под воздействием х- или у-лучей были получены варианты X. oryzae, дефицитные по типу питания.
Более сильным бактерицидным действием по сравнению с гамма-лучами обладают альфа- и бета-лучи. Следует отметить, что непродолжительное влияние лучистой энергии оказывает стимулирующее действие на рост и развитие микроорганизмов. При продолжительном воздействии сначала падает интенсивность роста, затем наступает гибель живых организмов.
Можно пользоваться следующими приборами: циклотроны, высоковольтные ускорители ионов, атомные реакторы как источники нейтронного излучения; УФ – лампа БУВ-15, где преобладают волны длиной 2378 А; альфа-излучение – источник радиоактивного полония (Ро210).

Ультракороткие волны
Ультракороткие волны обладают бактерицидным действием в отношении многих микроорганизмов. При прохождении через среду электромагнитные волны разной длины вызывают сильный тепловой эффект, вследствие чего наступает гибель бактерий. Под воздействием ультракоротких волн замедляется рост бактерий, изменяются морфологические признаки (появляются R-варианты). Эффект действия ультракоротких волн зависит от количества бактерий, среды, объема жидкости и длины волны. При определенных условиях и подъеме температуры до 120–200° С можно использовать волны ультравысокой частоты для стерилизации, перевязочного материала, в консервном производстве и др.

Ультразвук
Ультразвуковые волны, т. е. волны с частотой колебания более 20000 в секунду, невоспринимаемые человеком, обладают бактерицидным действием. Действие ультразвука приводит к изменению биохимической активности бактерий, нарушению проницаемости клеточных стенок и внутриклеточных структур. Этим объясняется чувствительность «озвученных» бактерий к антибиотикам и некоторым химическим веществам. Чувствительность микроорганизмов к ультразвуку возрастает с повышением температуры. Источником ультразвуковых волн может служить пьезокварцевый генератор. Летальный эффект возрастает с увеличением интенсивности ультразвука и времени его действия.

Давление
Под влиянием высокого давления в 2000–3000 атм и выше жизнедеятельность бактерий не прекращается, но наблюдается угнетение роста, замедление движения и размножения, снижение вирулентности, активности окислительных ферментов и др. После снятия воздействия давления все нормальные функции бактерий восстанавливаются.

Механическое воздействие
Сильные и частые сотрясения, например в Шюттель-аппарате со стеклянными бусами или песком, приводят к резкому уменьшению количества жизнеспособных бактерий. Слабые и редкие механические встряхивания могут даже благоприятно воздействовать на бактерии, что зачастую наблюдается при выращивании культуры бактерий на жидких средах. Устойчивость к механическим травмам зависит от строения клеточных стенок бактерий, наличие же капсулы никакой роли не играет.

Действие химических веществ
Известны многие химические вещества, которые характеризуются высоким бактерицидным действием. Эти вещества, получившие название антисептических или дезинфицирующих, являются представителями различных химических групп: минеральные кислоты (серная, соляная, азотная), щелочи (едкий натр, едкое кали), металлоиды (хлор, бром, йод), соли тяжелых металлов (меди, свинца, платины, серебра, мышьяка и главным образом ртути), органические соединения (фенолы, спирты, анилиновые краски, эфир, хлороформ и др.).
Для использования указанных веществ разработаны специальные методики, изложенные в специальных руководствах по микробиологии в защите растений.
Бактерицидность указанных химических веществ является следствием их действия, приводящим к нарушению физико-химической структуры микробной клетки: они. угнетают гидролитическую и дегидразную активность бактерий, ферментативную активность амилаз и протеаз, вызывают окисление и денатурацию клеточного белка и другие необратимые изменения клетки.


Имя:*
E-Mail:
Комментарий: