Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений на твердых питательных средах

03.02.2014

В 12 стерильных пробирок разливают по 1 мл разжиженного нагреванием агара с соблюдением обычных правил стерильности. Пробирки с агаром ставят в водяную баню при температуре 55–60° С, чтобы агар оставался в жидком состоянии. В 11 других пробирках готовят разведения антибиотиков в дистиллированной воде с таким расчетом, чтобы концентрация в каждой последующей пробирке была в два раза меньше, чем в предыдущей. Для этого во все 11 пробирок разливают по 2 мл стерильной дистиллированной воды. В первую пробирку добавляют 1 мл раствора антибиотика, в четыре раза более концентрированного, чем тот, который хотят получить в агаре. Содержимое пробирки хорошо перемешивают и 2 мл полученного разведения переносят во вторую пробирку и т. д. до 11-й. 12-я пробирка содержит чистую дистиллированную воду. Затем к первой пробирке с агаром добавляют 1 мл раствора антибиотика, содержащегося в первой пробирке серии последовательных разведений антибиотика. Раствор антибиотика тщательно перемешивают с агаром легким раскачиванием между ладонями рук и пробирку со смесью кладут наклонно, чтобы получить агаровый косячок. Ко второй пробирке добавляют 1 мл раствора антибиотика из второй пробирки серии последовательных разведений антибиотика и т. д., 12-я пробирка содержит агар, смешанный с дистиллированной водой, и служит контролем пригодности среды для развития изучаемого микроба. В течение нескольких часов пробирки выдерживают в наклонном положении, а затем засевают при помощи петли по средней линии агарового косяка. Для засева берут суспензию микробов, приготовленную на стерильной водопроводной воде из 24–48 часовой культуры микроба на агаре и содержащую 250–500 млн. бактериальных тел в 1 мл. Засеянные пробирки выдерживают при оптимальной для микроба температуре в течение 16–18 час, а затем учитывают результаты. Определение бактериостатической концентрации проводится как и при использовании жидких питательных сред. Большим преимуществом этого метода является меньшая необходимость строгого соблюдения всех предосторожностей асептики. Отдельные посторонние микробы, попавшие в агар, образуют обособленные колонии, наличие которых не затрудняет чтения результатов.
При наличии большого количества штаммов агаровые среды с антибиотиками в количестве 10–20 мл разливают в чашки Петри. Каждая чашка Петри может служить для засева полосками пяти-шести штаммов.