Ускоренный метод определения чувствительности к антибиотикам

03.02.2014

1. Учет результатов определения чувствительности бактерий к антибиотикам при использовании для этой цели описанных здесь методов производится лишь через 16–18 час с момента постановки опыта. Дюфренуа и Прайт (1947), а затем Фурер (1953), Соболев и Власова (1962) предложили ускоренный метод определения чувствительности бактерий к антибиотикам, положив в основу свойство большинства микроорганизмов изменять окислительно-восстановительный потенциал питательной среды в процессе роста бактерий и использовав для этой цели различные rН2-индикаторы, внося их в питательные среды. В качестве таких индикаторов можно использовать 2,6-ди- хлорфенолиндофенол, трифенилтетразолхлорид, красную кровяную соль с железоаммиачными квасцами и другие. Для определения чувствительности ускоренным методом используют двухслойный 1,5%-ный агар на переваре Готтингера с содержанием аминного азота 133-135 мг%, pH среды 7,2–7,4. Для нижнего слоя использован 2%-ный водный агар с pH 6,8– 7,0, приготовленный на дистиллированной воде. Изучаемой культурой (из расчета 200 млн. микробных тел на 1 мл среды) заражали верхний слой агара, затем на его застывшую поверхность накладывали диски, пропитанные антибиотиками. Через 3,5–4 час инкубации при 37° С поверхность агара в чашках обрабатывали растворами реактивов, приготовленных на дистиллированной воде, pH среды 7,3–7,4. Наиболее четкие результаты дают следующие концентрации реактивов: 0,2%-ный раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола, 1%-ный раствор трифенилтетразолхлорида, 2%-ные растворы красной кровяной соли и железоаммиачных квасцов. При использовании красной кровяной соли и железоаммиачных квасцов поверхность чашек последовательно обрабатывают в течение 5 мин раствором красной кровяной соли и 2 мин раствором железоаммиачных квасцов. При работе с трифенилтетразолхлоридом чашки с исследуемой культурой инкубируют в термостате в течение 3,5 час, затем вынимают, заливают раствором реактива и вновь помещают в термостат на 20–30 мин. Этот метод основан на способности указанных реактивов давать цветные реакции восстановления с продуктами жизнедеятельности растущих микробов. Вследствие этого вся поверхность агаровой пластинки, засеянной тест-микробом, например стафилококком, где происходит активный рост и обмен веществ этого микроба, окрашивается красной кровяной солью и железоаммиачными квасцами в сине-зеленый цвет. Зоны задержки роста стафилококка не окрашиваются. Это позволяет легко измерять зоны задержки роста и уже через 3,5–4 час дать оценку степени чувствительности исследуемого штамма. Данные определения чувствительности, полученные при помощи ускоренных методов, совпадают с результатами при помощи стандартного метода дисков.
2. Диски фильтровальной бумаги пропитывают растворами питательной среды, трифенилтетразолхлорида и антибиотиком, а затем высушивают в вакууме. Высушенные диски раскладывают в пластмассовые коробочки с 25 ячейками. На каждый диск наносят две-три капли суспензии исследуемого микроба и ставят в термостат на 2–6 час. О результатах судят по изменению окраски диска.