Методика исследования антибактериальных свойств сырых соков растений
03.02.2014
Для изучения антибактериальных свойств сырых соков растений описано несколько методов – кашицы, фильтратов и экстрактов.
Метод кашицы. Этот метод обычно применяется для первых, разведывательных опытов. Заключается он в тщательном растирании в ступке различных органов растений и в дальнейшем испытании антибактериальной активности полученной таким образом кашицы. Если требуется определить наличие летучих фракций веществ, имеющихся в кашице, то последнюю накладывают на крышку чашки Петри, в которой проведен на твердой питательной среде посев испытуемых бактерий. Чашку ставят в такое положение, чтобы посеянные бактерии находились над кашицей. В других случаях кашицу накладывают непосредственно на посевы различных видов бактерий, сделанные в чашки Петри. Некоторые авторы используют выжатый из кашицы сок. При этом можно применять метод капель либо метод дисков, стеклянных или фарфоровых цилиндриков и др.
Основное преимущество этих методов в том, что при их помощи можно провести одновременно значительное количество исследований. Недостатки метода следующие.
1. В кашице могут находиться различные сапрофитные микробы (возможно и антагонистические), которые в процессе своего развития могут производить действие, равноценное антимикробным веществам растений, либо тормозить проявление действия фитонцидов, приводя таким образом к неправильным результатам. Поэтому рекомендуется каждую часть растения тщательно промыть текучей водопроводной водой в течение 10–15 мин, а затем несколько раз стерильной. Промытый орган растения измельчают в стерильной ступке и полученную кашицу помещают в стерильную чашку Петри и затем стерильно ее используют. Однако загрязнение кашицы микрофлорой может произойти в результате наличия ее во внутренних тканях растений. Поэтому необходимо выдерживать чашки Петри до десяти дней, чтобы дать возможность прорасти разным микробам, несмотря на то, что для развития эпифитной микрофлоры вполне достаточно два-три дня.
2. Фитонцидные свойства растений не постоянны, а изменяются в зависимости от условий. Большое значение имеют сортовые особенности растений, возраст, тот или иной орган растения – листья (молодые или старые), корни, стебли, плоды (зеленые или зрелые), зерно, цветки и разные их части, почки и кора деревьев, сезон года, характер приспособленности возбудителя к растению и индивидуальное состояние каждого растения. Поэтому пробу для анализа нужно отбирать из 15–20 растений, строго придерживаясь определенного яруса. Все исследования необходимо вести в динамике роста и развития растений в течение всего вегетационного периода.
3. В некоторых случаях из-за ничтожного количества микробного вещества в кашице не представляется возможным достаточно четко определить его активность.
Метод экстрактов. Для испытания антибактериальной активности растительных соков можно пользоваться различными вытяжками: водными, спиртовыми, эфирными, ацетоновыми и др. Для усиления действия таких вытяжек их сгущают до определенного объема либо выпаривают до сухого остатка, который затем разводят стерильной водой, после чего исследуют методом наложения капель или при помощи серийных разведений. Метод экстрагирования антимикробных веществ различными растворителями в настоящее время очень часто употребляется и дает наиболее достоверные результаты.
Метод фильтратов. Фильтрованием растительных соков достигается обезвреживание их от микробов, т. е. их стерильность. Обычно для получения таких фильтратов из измельченной растительной кашицы отжимают сок, который можно получить при помощи специального пресса. После этого сок профильтровывают. Для этой цели применяются фильтры Зейтца, мембранные фильтры различной пористости, коллодийные мешочки и др. Полученные таким образом фильтраты испытывают на твердых питательных средах методом серийных разведений.
Однако такие соки часто теряют свои летучие фракции и иногда снижают активность антимикробного действия. В фильтратах иногда образуется сильный осадок, увлекающий при его выпадении и активное вещество. Некоторые фильтраты при стоянии даже в течение нескольких часов начинают расслаиваться на несколько ярусов, различных по своей активности. В отличие от метода кашицы метод фильтратов не дает возможности поставить одновременно сравнительно широкое испытание соков растений из-за медленности их приготовления.
