Новости
26.04.2017


26.04.2017


23.04.2017


23.04.2017


22.04.2017


03.02.2014

Метод основан на способности красной кровяной соли (феррицианида) – K3Fe(CN)6 восстанавливаться в щелочной среде при наличии глюкозы в желтую кровяную соль (ферроцианид) – K4Fe(CN)6, причем оставшийся неизрасходованный избыток феррицианида определяется при наличии уксусной кислоты йодометрическим путем.

Микроопределение сахара по Хагедорн-Иенсену

Поскольку эта реакция обратима и приводит к равновесию системы и для того чтобы она проходила количественно слева направо, необходимо удалить из реакционной смеси ферроцианид, что и производится при помощи сернокислого цинка (II). Количество феррицианида, которое осталось после реакции, определяют, титруя раствором гипосульфита (III).
Метод служит для определения глюкозы при наличии ее в количестве 0,002–0,382 мг, лучшие результаты получаются в пределах 0,02–0,3 мг.
Применяются следующие реактивы.
1. 0,1-н. раствор едкого натрия. Титр раствора может быть, немного слабее, но не должен превышать 0,1-н.
2. 0,45%-ный раствор сернокислого цинка.
Оба эти раствора служат для осаждения белков, приготавливаются каждые восемь дней заново из 2-н. едкого натрия и 45%-ного раствора ZnSO4.
3. 0,005-н. раствор феррицианида в 0,1-н. растворе углекислого натрия. 1,65 г (точная навеска) чистейшего перекристаллизованного KaFe(CN)6 и 10,6 г безводной соды растворяют в 1 л воды. Смесь может храниться в темноте и на холоде в течение нескольких месяцев.
4. Раствор йодистого калия, сернокислого цинка и хлористого натрия. В качестве запасного служит раствор 50 г сернокислого цинка и 250 г чистого хлористого натрия в 1 л воды. По мере надобности из данного раствора приготовляют рабочий реактив, добавляя лишь такое количество йодистого калия, чтобы его концентрация в смеси составляла 2,5%.
5. 3%-ная уксусная кислота, не содержащая железа.
6. 1%-ный раствор растворимого крахмала в насыщенном растворе хлористого натрия или калия.
7. 0,005-н. раствор гипосульфита на прокипяченной воде, приготовляемый ежедневно соответствующим разбавлением 0,1-н. раствора, как более устойчивого при хранении. Титр устанавливается по раствору йодноватокислого калия (KJO3) той же крепости.
Все реактивы готовятся на дважды перегнанной воде.
Определение. Для осаждения белков к испытуемым вытяжкам (1–2 мл) прибавляют последовательно один объем 0,1-н. раствора NaOH и пять объемов 0,45%-ного ZnSO4 и нагревают 3 мин в кипящей водяной бане, в результате чего осаждается белок. Для отделения осадка жидкость фильтруют через промытую горячей водой вату, помещенную в маленькую воронку, и дважды промывают колбу и фильтр водой (3 мл).
К прозрачному фильтрату (около 15 мл), собранному в пробирку 30х90 мм или колбу, приливают точно 2 мл щелочного раствора феррицианида и ставят на 15 мин в интенсивно кипящую водяную баню. Срок кипения следует строго соблюдать. По истечении 15 мин пробирки или колбы немедленно охлаждают под струей холодной воды. После выравнивания температуры к содержимому прибавляют по 3 мл смеси (4) с йодистым калием, взбалтывают, подкисляют 2 мл уксусной кислоты и титруют выделившийся йод раствором гипосульфита из 2 мл микробюретки до еле заметной желтой окраски. После чего прибавляют две-три капли крахмального раствора и оканчивают титрование в момент полного обесцвечивания.
Одновременно с опытом проводят контрольное определение, в котором исследуемую вытяжку заменяют равным объемом воды. По количеству миллилитров раствора гипосульфита, ушедшего на титрование, вычисляют соответствующее количество глюкозы (в миллиграммах) по прилагаемой табл. 9. Оба результата как опытного, так и контрольного определения перечисляют на глюкозу и по разности, судят о содержании глюкозы по взятой пробе. Вычисление глюкозы по разности в цифрах непосредственного титрования ведет к неправильным результатам.
Микроопределение сахара по Хагедорн-Иенсену