Новости
21.11.2017


19.11.2017


19.11.2017


19.11.2017


19.11.2017


03.02.2014

В настоящее время разработано несколько методов хроматографии. Широко применяется метод распределительной бумажной хроматографии. Этим методом можно определить ничтожно малые количества различных аминокислот, сахаров и многих других веществ.
Разделение при помощи бумажной хроматографии основано на различной величине коэффициентов распределения веществ между двумя несмешивающимися жидкими фазами. Одной жидкой фазой обычно является вода, другой – водонасыщенный органический растворитель, не смешивающийся или частично смешивающийся с водой.
Одна фаза неподвижна, вторая – подвижна. Коэффициент распределения = концентрация вещества в водной фазе/концентрация вещества в неводной фазе.
В методе распределительной хроматографии на бумаге неподвижной фазой является вода, которая содержится в фильтровальной бумаге.
Подвижной фазой являются водонасыщенные органические растворители, такие как н-бутанол, фенол, крезол, коллидин и др.
Одну или несколько капель смеси изучаемых веществ наносят на один конец длинной полосы бумаги и высушивают. Затем этот конец бумаги опускают в органический растворитель, который под действием капиллярных сил движется вдоль полосы бумаги. Когда он проходит через участок бумаги, где нанесена смесь веществ, то эти вещества переходят частично (соответственно коэффициенту их распределения) в органический растворитель. Двигаясь дальше, растворитель доходит до участка бумаги, не содержащего данного вещества, где происходит вторичное перераспределение веществ между органическим растворителем и водной фазой бумаги. При непрерывном токе растворителя осуществляется многократное перераспределение веществ, в результате оно переносится на некоторое расстояние от старта.
Вещество уходит от старта тем дальше, чем меньше коэффициент распределения его между водой и органическим растворителем. Исследуемые вещества располагаются на бумаге в виде пятен или полос. Для их обнаружения используют цветные реакции, иногда пользуются различной флуоресценцией веществ в ультрафиолетовом свете.
Для идентификации веществ используют величину коэффициента скорости их движения Rf:

Хроматография

Rf рассчитывается как отношение расстояния, пройденного веществом, к расстоянию, пройденному за это время фронтом растворителя. В специальных таблицах можно найти величину Rf для различных веществ, разделяемых при помощи разных растворителей на том или ином сорте бумаги.
Для более точной идентификации на такую же бумагу рядом с испытуемой смесью наносят раствор «метчика», т. е. известного вещества, соответствующего тому, которое предполагается найти в исследуемом растворе.
Если через бумагу, где нанесена смесь веществ, растворитель проходит в одном направлении, то получают одномерную хроматограмму. При исследовании сложной смеси через бумагу пропускают другой растворитель в направлении, перпендикулярном движению первого. Второй растворитель подбирают так, чтобы Rf не разделенных ранее веществ был различным. Получают так называемую двухмерную хроматограмму.
Существуют два вида бумажных хроматограмм: нисходящие, по которым растворитель движется вниз по фильтровальной бумаге, и восходящие – растворитель движется вверх по бумаге.
Для серийного определения количества аминокислот в изучаемом материале можно пользоваться методом А.Н. Бояркина и М.И. Дмитриевой, позволяющим разделить аминокислоты на восходящих хроматограммах малого размера.