Фотометрический метод. Сущность метода состоит в экстаркции каротина петролейным эфиром или бензином и фотометрировании окрашенных растворов. Интенсивность окраски зависит от содержания каротина. Метод применим для зеленой массы, сена, силоса, сенажа, искусственно высушенных травяных кормов, муки из древесной зелени.
Аппаратура: фотоэлектроколориметр или спектрофотометр; измельчитель проб растений; мельница лабораторная; термостат воздушный или водяной, обеспечивающий поддержание температуры 35±3°С.
Приготовление реактивов:
1. Оксид алюминия 10%-ной влажности. К 900 г безводного оксида алюминия добавляют 100 см3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Реактив хранят в герметически закрытом сосуде с притертой пробкой и используют для анализа на следующий день.
2. Основной (стандартный) раствор бихромата калия: 0,720 г бихромата калия, взвешенного с погрешностью не более 0,001 г, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 см3, добавляют воды до метки и тщательно перемешивают. Оптическая плотность полученного раствора соответствует оптической плотности раствора каротина концентрации 4,16 мкг/см3. Срок хранения раствора — 1 год.
3. Растворы сравнения. В мерные колбы вместимостью 100 см3 из бюретки приливают 10, 20, 30, 40, 50 см3 (каждый раз от нуля) основного раствора бихромата калия и добавляют до метки дистиллированной воды, тщательно перемешивают. Срок хранения растворов сравнения — не более 3 мес.
Построение градуировочного графика. Растворы сравнения фотометрируют при длине волны 450 нм относительно дистиллированной воды в кюветах с длиной оптического пути 5,10 или 20 мм. Строят график зависимости оптической плотности растворов сравнения от объема основного раствора бихромата калия, взятого для их приготовления.
Градуировочный график проверяют в день проведения испытаний по 2-му и 5-му растворам сравнения. При нестабильной работе прибора фотометрируют все растворы сравнения и строят график.
Подготовка проб. Пробу зеленой массы травянистых культур, силоса, сенажа, сена, травяной муки или витаминной муки из древесной зелени, гранул или брикетов измельчают на приборе или ножницами до отрезков длиной 1-3 см. Измельченную пробу корма тщательно перемешивают на полиэтиленовой пленке и методом квартования выделяют часть пробы массой 100-200 г, которую размалывают на мельнице в течение 2-4 мин. Кормовые корнеплоды измельчают на мезгообразователе или растирают на терке. Травяную муку с частицами размером 1-2 мм анализируют без предварительного размалывания.
Проведение испытания и обработка результатов. Из подготовленной пробы травянистых культур, силоса, сенажа берут навеску массой 1-5 г (в зависимости от ожидаемого содержания каротина) с погрешностью не более 0,05 г, переносят в фарфоровую ступку, добавляют 5 г песка или мелко измельченного стекла, 15 г сульфата натрия (при навеске 4-5 г добавляют 20-25 г сульфата натрия). В навеску силоса и сенажа, кроме того, добавляют на кончике ножа бикарбонат натрия. Смесь тщательно растирают не менее 3-4 мин. Хорошо растертый и обезвоженный корм без потерь переносят в банку или колбу вместимостью 200 см3, приливают 100 см3 петролейного эфира или бензина, обмыв ступку и пестик его минимальным количеством. Добавляют в банку 10 г оксида алюминия 10%-ной влажности и 0,5 г растертого до порошкообразного состояния оксида кальция, перемешивают стеклянной палочкой, плотно закрывают банку полиэтиленовой крышкой, а колбу — пробкой.
Из подготовленной пробы сена, травяной или витаминной муки, брикетов или гранул берут навеску массой 1-3 г (для сена — до 5 г) и переносят в банку или колбу вместимостью 200 см3. Добавляют 5 г безводного сульфата натрия, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, вносят 10 г окиси алюминия 10%-ной влажности, 0,5 г оксида кальция, 100 см3 петролейного эфира или бензина и снова перемешивают.
Измельчать анализируемую пробу можно также на гомогенизаторе. В этом случае из подготовленной пробы сена, силоса, сенажа или зеленой массы травянистых культур берут навеску массой 1-5 г, переносят в стакан гомогенизатора, на дно которого насыпано 15 г сульфата натрия (в навеску силоса и сенажа добавляют бикарбонат натрия), приливают 50-60 см3 экстрагента и гомогенизируют 2 мин при частоте вращения вала гомогенизатора 5 тыс. об./мин. Затем навеску переносят в банку или колбу, добавляют 10 г оксида алюминия 10% -ной влажности, 0,5 г оксида кальция и 100 см3 экстрагента, обмывая им стакан гомогенизатора, перемешивают. Плотно закрытые банки или колбы оставляют в темном месте на 14-18 ч.
При проведении экспресс-испытания единичных образцов допускается заменять настаивание термостатированием. Для этого плотно закрытые банки или колбы помещают на 2 ч в предварительно нагретый до 35°С термостат. Затем пробы охлаждают до комнатной температуры. В целях безопасности работы надо следить за строгим соблюдением температуры во время термостатирования. Перед работой необходимо убедиться в исправности термостата и правильности показаний термометра.
После настаивания или термостатирования, не взмучивая, отбирают шприцом прозрачный отстоявшийся раствор и переносят в кювету фотоэлектроколориметра. Фотометрирование экстрактов каротина проводят относительно петролейного эфира или бензина.
При оптической плотности раствора более 0,7 в мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 25 см3 анализируемой вытяжки, доводят до метки петролейным эфиром (или бензином), перемешивают и вновь фотометрируют. Полученные результаты удваивают.
Содержание каротина (X, мг/кг) в корме натуральной влажности вычисляют по формуле

где V — объем основного раствора, найденный по графику, см3; m — масса навески, г; 0,00416 — коэффициент пересчета оптической плотности бихромата калия в количество каротина.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое двух параллельных измерений.
Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа. Предельно допустимые расхождения между результатами двух параллельных определений (D) составляют

где х — среднее арифметическое результатов параллельных определений.
Содержание каротина в сухом веществе (X1, мг/кг) вычисляют по формуле

где X — содержание каротина в корме натуральной влажности, мг/кг; W — влажность корма, %.
Все работы с петролейным эфиром и бензином проводят в вытяжном шкафу. При хранении эфира или бензина и проведении анализов необходимо соблюдать требования техники безопасности работы с легковоспламеняющимися и взрывоопасными веществами.
Метод с использованием пробирочной шкалы заключается в сравнении интенсивности окраски испытуемого раствора и стандартных растворов бихромата калия.
Для приготовления пробирочной шкалы в 14-мерных колбах вместимостью 100 см3 с помощью бюретки вместимостью 50 см3 вносят определенный объем основного раствора бихромата калия (табл. 4.2).
В колбы добавляют дистиллированной воды до метки, растворы перемешивают и разливают в пронумерованные пробирки, которые плотно закрывают пробками. Номер пробирки должен соответствовать номеру колбы.
Пробирочную шкалу хранят в темном месте в течение года. Для шкалы подбирают пробирки одинакового диаметра и цвета.

Проведение испытания. Прозрачный экстракт каротина, полученный после выдерживания в термостате в течение 2 ч или настаивания в течение 14-18 ч, не взмучивая, переносят в пробирку и сравнивают со шкалой на фоне белой бумаги. Из шкалы выбирают пробирку, наиболее соответствующую по цвету испытуемому раствору. Содержание каротина находят по таблице. Если окраска испытуемого раствора интенсивнее, чем в пробирке № 14, его разбавляют в 2 раза бензином или петролейным эфиром и снова сравнивают с пробирочной шкалой. Полученный результат удваивают.
Если для анализа испытуемой пробы взята навеска массой 1,5 или 2,5 г, то результат для навески массой 1 г делят соответственно на 1,5 или на 2,5.

---

Имя:*
E-Mail:
Комментарий:

Добавить