Микроопределение азота колориметрическим способом

03.02.2014

Исследуемую взвесь бактериальных клеток (1–5 мл) сжигают при наличии серной кислоты. Сжигание заканчивается быстрее, если к серной кислоте прибавить 1 мл пергидроля. После сжигания содержимое переносят количественно в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки. Из этого объема берут 1, 2 или 5 мл (в зависимости от количества азота) и переносят в мерную колбу на 100 мл, подщелачивают, определяя реакцию по лакмусовой бумажке, добавляют 2 мл реактива Неслера или Винклера, в результате чего жидкость окрашивается. Исследуемая жидкость при этом должна быть прозрачна. Определенное количество ее берут в кюветы и сравнивают со стандартным раствором в фотоэлектроколориметре.
Для приготовления стандартного раствора берут 235 мг высушенного до постоянного веса сернокислого аммония ((NH4)2SO4) или 190,6 мг хлористого аммония (NH4Cl) растворяют в 250 мл дистиллированной воды. В каждом миллилитре данного раствора содержится 200 мкг азота.
Для получения калибровочной кривой из исходного раствора путем соответствующего разведения, приготавливают растворы, содержащие от 5 до 100 мкг азота в 1 мл.
Реактив Неслера. 7,5 г KJ и 5,0 г кристаллического J2 смешивают в колбе с 25 мл дистиллированной воды и 7,0– 7,5 г Hg. Энергично помешивают при легком нагревании. Смесь должна приобрести слегка зеленовато-желтый цвет. Раствор оставляют на ночь, общее количество жидкости доводят до объема 100 мл, прибавляют такой же объем воды и 200 мл 10%-ного раствора NaOH, свободного от карбонатов, перемешивают, фильтруют. Реактив сохраняют в темной посуде.
Реактив Винклера. 15 г HgJ2 и 10 г KJ растирают в ступке, добавляя воду по каплям до 3 мл. Готовят раствор, содержащий 40 г щелочи в 300 мл воды. Этим раствором смывают в мерную колбу на 500 мл содержимое ступки и доводят до метки. Приготовленный раствор оставляют на несколько дней, чтобы выпал осадок. Светло-желтый реактив Винклера сохраняют в темной посуде.